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技術(shù)文章

貝克曼Agencourt核酸提取與純化試劑使用指南

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一、產(chǎn)品概述

貝克曼Agencourt核酸提取與純化試劑是專為高通量、高效率提取高質(zhì)量核酸(DNA/RNA)設(shè)計的系列產(chǎn)品,適用于血液、組織、細胞、病毒等多種樣本類型,廣泛應(yīng)用于二代測序(NGS)、PCR擴增、基因分型等分子生物學(xué)實驗。其核心優(yōu)勢在于結(jié)合磁珠法或離心柱法技術(shù),實現(xiàn)快速、低殘留的核酸純化,適配自動化平臺(如Biomek系列工作站),提升實驗通量與重復(fù)性。

二、使用前準(zhǔn)備

1. 試劑儲存與檢查

儲存條件:嚴格按說明書要求保存(通常磁珠法試劑需2-8℃避光,部分凍干組分需-20℃保存);避免反復(fù)凍融(尤其是酶類或磁珠懸液)。

有效期與完整性:使用前核對試劑盒有效期,檢查包裝是否破損、試劑是否泄漏或變色(如磁珠懸液出現(xiàn)沉淀需充分混勻后再用)。

2. 實驗環(huán)境與耗材

環(huán)境:在潔凈實驗室(推薦超凈臺或生物安全柜)操作,避免核酸酶污染(使用無核酸酶的離心管、吸頭及水)。

耗材適配性:確保使用試劑盒配套的耗材(如特定規(guī)格的96孔板、磁力架或離心柱),避免因兼容性問題影響結(jié)合效率。

三、操作流程(以磁珠法為例)

1. 樣本裂解

根據(jù)樣本類型選擇預(yù)處理方案(如血液樣本需裂解紅細胞,組織樣本需機械或酶解破碎細胞),確保核酸充分釋放。

加入裂解液后,按說明書控制孵育時間與溫度(如室溫裂解10分鐘或56℃加熱15分鐘),促進細胞膜破裂。

2. 核酸結(jié)合

向裂解產(chǎn)物中加入磁珠懸液(磁珠表面修飾有核酸親和基團),輕柔混勻(避免劇烈震蕩導(dǎo)致磁珠團聚),室溫孵育5-10分鐘,使核酸與磁珠充分結(jié)合。

關(guān)鍵點:孵育時間需嚴格控制,過短可能導(dǎo)致結(jié)合不wan全,過長可能引入非特異性吸附。

3. 磁珠捕獲與洗滌

將反應(yīng)體系置于磁力架上(或使用配套磁力模塊),靜置1-2分鐘至磁珠聚集,棄上清(去除蛋白質(zhì)、鹽離子等雜質(zhì))。

加入洗滌液(通常含乙醇或低鹽緩沖液),輕柔重懸磁珠后再次磁分離,重復(fù)洗滌2-3次(洗滌次數(shù)和體積需按說明書優(yōu)化,避免過度洗滌導(dǎo)致核酸損失)。

4. 核酸洗脫

棄最后一次洗滌液后,加入預(yù)熱的洗脫緩沖液(通常為無核酸酶水或TE緩沖液,溫度建議50-70℃以增強洗脫效率),輕柔混勻后室溫孵育2-5分鐘。

再次磁分離,轉(zhuǎn)移上清液(含高純度核酸)至新管,避免吸到磁珠。

四、關(guān)鍵注意事項

1. 操作規(guī)范

防污染:全程佩戴手套,使用無核酸酶耗材;避免交叉污染(如不同樣本間需更換吸頭,磁力架需定期用75%乙醇擦拭)。

動作輕柔:磁珠結(jié)合與洗滌時避免劇烈渦旋或吹打,防止磁珠破碎或核酸斷裂。

2. 質(zhì)量控制

濃度與純度檢測:使用分光光度計(如NanoDrop)或熒光定量儀(如Qubit)檢測核酸濃度(A260/A280比值DNA應(yīng)在1.7-1.9,RNA應(yīng)在1.8-2.0);通過瓊脂糖凝膠電泳觀察條帶完整性(無拖尾或降解)。

對照設(shè)置:每批次實驗建議設(shè)置陽性對照(已知濃度核酸樣本)和陰性對照(無模板樣本),驗證提取效率與特異性。

3. 常見問題處理

核酸產(chǎn)量低:檢查樣本起始量是否足夠、裂解是否充分(如血液樣本需確保紅細胞wan全裂解);優(yōu)化洗滌次數(shù)(減少過度洗滌)。

純度異常(A260/A280偏低):可能殘留蛋白質(zhì),增加酚-氯法預(yù)處理或延長洗滌時間(使用高鹽洗滌液)。

自動化平臺故障:檢查磁力架吸附強度、移液體積準(zhǔn)確性,確保試劑溫度符合要求(如洗脫緩沖液需預(yù)熱)。

4. 廢棄物處理

含生物危害樣本的耗材(如裂解產(chǎn)物、洗滌液)需按實驗室生物安全等級處理(高壓滅菌或化學(xué)消毒);廢棄磁珠按一般固體廢棄物處置(若含危險化學(xué)品需特殊處理)。

五、總結(jié)

貝克曼Agencourt核酸提取試劑通過優(yōu)化的磁珠結(jié)合與洗滌體系,可高效獲得高純度、高完整性的核酸,適配高通量實驗需求。嚴格遵循操作規(guī)范、控制關(guān)鍵參數(shù)(如孵育時間、洗滌次數(shù))并做好質(zhì)控,是確保實驗成功的關(guān)鍵。


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