貝克曼Agencourt核酸提取與純化試劑使用指南

一、產品概述

貝克曼Agencourt核酸提取與純化試劑是專為高通量、高效率提取高質量核酸（DNA/RNA）設計的系列產品，適用于血液、組織、細胞、病毒等多種樣本類型，廣泛應用于二代測序（NGS）、PCR擴增、基因分型等分子生物學實驗。其核心優勢在于結合磁珠法或離心柱法技術，實現快速、低殘留的核酸純化，適配自動化平臺（如Biomek系列工作站），提升實驗通量與重復性。

二、使用前準備

1. 試劑儲存與檢查

儲存條件：嚴格按說明書要求保存（通常磁珠法試劑需2-8℃避光，部分凍干組分需-20℃保存）；避免反復凍融（尤其是酶類或磁珠懸液）。

有效期與完整性：使用前核對試劑盒有效期，檢查包裝是否破損、試劑是否泄漏或變色（如磁珠懸液出現沉淀需充分混勻后再用）。

2. 實驗環境與耗材

環境：在潔凈實驗室（推薦超凈臺或生物安全柜）操作，避免核酸酶污染（使用無核酸酶的離心管、吸頭及水）。

耗材適配性：確保使用試劑盒配套的耗材（如特定規格的96孔板、磁力架或離心柱），避免因兼容性問題影響結合效率。

三、操作流程（以磁珠法為例）

1. 樣本裂解

根據樣本類型選擇預處理方案（如血液樣本需裂解紅細胞，組織樣本需機械或酶解破碎細胞），確保核酸充分釋放。

加入裂解液后，按說明書控制孵育時間與溫度（如室溫裂解10分鐘或56℃加熱15分鐘），促進細胞膜破裂。

2. 核酸結合

向裂解產物中加入磁珠懸液（磁珠表面修飾有核酸親和基團），輕柔混勻（避免劇烈震蕩導致磁珠團聚），室溫孵育5-10分鐘，使核酸與磁珠充分結合。

關鍵點：孵育時間需嚴格控制，過短可能導致結合不wan全，過長可能引入非特異性吸附。

3. 磁珠捕獲與洗滌

將反應體系置于磁力架上（或使用配套磁力模塊），靜置1-2分鐘至磁珠聚集，棄上清（去除蛋白質、鹽離子等雜質）。

加入洗滌液（通常含乙醇或低鹽緩沖液），輕柔重懸磁珠后再次磁分離，重復洗滌2-3次（洗滌次數和體積需按說明書優化，避免過度洗滌導致核酸損失）。

4. 核酸洗脫

棄最后一次洗滌液后，加入預熱的洗脫緩沖液（通常為無核酸酶水或TE緩沖液，溫度建議50-70℃以增強洗脫效率），輕柔混勻后室溫孵育2-5分鐘。

再次磁分離，轉移上清液（含高純度核酸）至新管，避免吸到磁珠。

四、關鍵注意事項

1. 操作規范

防污染：全程佩戴手套，使用無核酸酶耗材；避免交叉污染（如不同樣本間需更換吸頭，磁力架需定期用75%乙醇擦拭）。

動作輕柔：磁珠結合與洗滌時避免劇烈渦旋或吹打，防止磁珠破碎或核酸斷裂。

2. 質量控制

濃度與純度檢測：使用分光光度計（如NanoDrop）或熒光定量儀（如Qubit）檢測核酸濃度（A260/A280比值DNA應在1.7-1.9，RNA應在1.8-2.0）；通過瓊脂糖凝膠電泳觀察條帶完整性（無拖尾或降解）。

對照設置：每批次實驗建議設置陽性對照（已知濃度核酸樣本）和陰性對照（無模板樣本），驗證提取效率與特異性。

3. 常見問題處理

核酸產量低：檢查樣本起始量是否足夠、裂解是否充分（如血液樣本需確保紅細胞wan全裂解）；優化洗滌次數（減少過度洗滌）。

純度異常（A260/A280偏低）：可能殘留蛋白質，增加酚-氯法預處理或延長洗滌時間（使用高鹽洗滌液）。

自動化平臺故障：檢查磁力架吸附強度、移液體積準確性，確保試劑溫度符合要求（如洗脫緩沖液需預熱）。

4. 廢棄物處理

含生物危害樣本的耗材（如裂解產物、洗滌液）需按實驗室生物安全等級處理（高壓滅菌或化學消毒）；廢棄磁珠按一般固體廢棄物處置（若含危險化學品需特殊處理）。

五、總結

貝克曼Agencourt核酸提取試劑通過優化的磁珠結合與洗滌體系，可高效獲得高純度、高完整性的核酸，適配高通量實驗需求。嚴格遵循操作規范、控制關鍵參數（如孵育時間、洗滌次數）并做好質控，是確保實驗成功的關鍵。